第201章35%（感谢牛津面的盟主！）
学校的实验室条件没那么好。
空调老化，地方不大，房间里人也有点多。
条件算是艰苦吧，大家却一点不觉得累，一个个热血沸腾的，就想著快点把这个项目做出来。
陈浩上次这么有动力的时候还是在大二夏天，跟老江去参加网吧举办的cs1.6网吧赛0
时过境迁。
曾经的4网癮少年，现在已经变成使用移液枪的高手了。
蔡卓群將无酶水吸出，打入离心管底部，反覆吹打。
王晓晴观察片刻后说：“测一下吧。”
蔡卓群点点头，拔下枪头，拿著样本走到nanodrop分光光度计前。
用移液枪吸取了1微升样本，滴在检测基座上，放下检测臂，在连接的旧桌上型电脑上点击了测量。
屏幕上很快跳出了数据。
陆晓林停下了手里的活，转头问道：“多少”
蔡卓群：“浓度12ng/ul，a260/280比值是1.32，a260/230比值是0.7。
c
王晓晴盯著屏幕看了一会儿，有点无奈：“这已经是第四批废样了————”
项目的难度远远超出除江河外所有人的预期。
虽然之前江河用加入dso的方法，解决了pcr扩增阶段引物二聚体的问题。
但解决了一个问题，接下来还会出现更多的问题——
现在的瓶颈，卡在了提取上。
irna在血液中的含量极低，且非常容易被血液中的rna酶降解。
纯度不够。
a260/280的比值正常应该在1.8到2.0之间，低於1.8就意味著样本中存在大量的蛋白质污染。
而a260/230比值只有0.7，更是说明里面混了大量的酚类物质或者盐离子。
用这种样本去做下一步的逆转录，杂质会让逆转录酶失活，后面的pcr扩增根本跑不出真实数据。
蔡卓群试图寻找原因：“王教授，是不是氯仿的用量不够我们在取上清液的时候，可能还是带入了一些中间层的蛋白质。”
王晓晴摇摇头：“上一批我们已经把氯仿的比例提高了百分之二十，离心时间也延长了五分钟，纯度是稍微好了一点，但是浓度直接掉到了5ng/ul以下。”
陆晓林在一旁分析：“血清里全是蛋白，游离的核酸少，trizoi提取法，用在血清上，天生就有缺陷。”
实验室眾人，陷入沉默。
其实在后世，有专门针对血清的柱提法商业试剂盒，傻瓜式操作，半个小时就能得到高纯度的irna。
但在08年，专门针对液体活检的试剂盒在国內根本买不到，就算买到了技术也还远未成熟，所以只能用最基础的化学试剂，手工一步步去抠。
蔡卓群问：“王教授，有什么办法没”
王晓晴：“別问我，江河呢江河去哪儿了”
陈浩举手：“老江说有点事来著，马上回来。”
王晓晴：“那大家先停一下吧，休息十分钟。”
晓晴教授现在也是学聪明了。
自己苦哈哈研究半天，不如江河回来一句话直接解决。
与其浪费脑细胞，还不如休息休息，保存体力————
眾人出去休息时。
易向晚和顾亦舟去给大家买水。
在路上，易向晚罕见地没有开玩笑，略显忧愁的说道：“师兄，你说咱们这项目，到底能成吗”
顾亦舟看了他一眼：“怎么了不想干了”
“哎呀，那肯定不是啊，只是————我在想一件事嗷，退一万步讲，就算我们今天把提取纯度的问题解决了，就算接下来的逆转录、pcr体系全部都解决了，然后呢”
顾亦舟皱著眉头。
易向晚接著说：“我们该如何验证呢既然是胰腺癌早筛，那到了最后，验证模型是否有效的话，我们需要真正的患者样本吧”
“而且，我们需要的是【看起来完全健康，但实际上刚患上极早期胰腺癌的患者的血】。”
其实这个问题，几个核心组员心里都有想过。
只是大家都在闷头干活，谁也没有捅破。
因为胰腺癌的隱蔽性极强。
当患者因为腹痛、黄疸去医院就诊时，往往已经是中晚期了。
极早期胰腺癌，患者自身没有任何症状，常规体检也查不出来。
所以，想要拿到这种样本，唯一的途径就是依靠完善的血清生物样本库。
就是医院长期保存大量体检人群的血清，几年后，当其中某些人被確诊为胰腺癌时，研究人员再把他们几年前还是健康状態时的血清找出来，用来测试江河的早筛模型，看看能不能在几年前的血液里发现异常的irna升高。
但现实是，08年的中国，没有医院拥有如此完善的高质量血清生物样本库。
协和也没有。
“所以，如果找不到验证数据，验证数据就没意义————”
“喝什么”顾亦舟打断了他。
“啊哦，呃，可乐吧，可乐就好。”
易向晚接过冰可乐，在自己的脖子上滚了一圈，好凉。
而后他说道：“师兄，我说这个不是打击老大的意思，我的意思是————”
“行了，別解释了，想那么多干嘛这些问题是老大需要考虑的，我们现在的任务是把提取这关过了，別到了最后，老大从欧洲、从挪威、从美国把样本找来了，结果咱们连rna都提不出来，那才叫丟人。
1
“靠，也是啊！確实有点想太多了————”
两个人带著水回到实验室。
发现江河已经回来了，正站在nanodrop的屏幕前。
而且王教授正在乖巧地匯报情况：“纯度提不上去，trizoi的局限性，血清里的蛋白含量远超组织，吸取上清液的时候，不可避免地会带入杂质，如果要避免带入杂质，就只能吸取最表层的少量液体，但那样rna的浓度又达不到下游pcr的要求，咋办”
江河淡然道：“不早跟你们说过了加糖原。”
实验室里的人都愣了一下。
老组员虽然听过江河讲这个事情，但是大家都不知道具体该怎么执行啊————
“噢，怪我，讲的不够细。”
江河隨后解释道：“在加入异丙醇沉淀之前，往水相里加入5微升浓度为5g/l的糖原作为共沉淀剂，不仅能作为载体帮助极微量的rna聚集沉淀，还能让最后形成的沉淀团块变得肉眼可见，方便后续洗涤，减少丟失。”
陆晓林思考了一下，提出了疑问：“可是这解决不了杂质的问题啊，只要我们用移液枪吸水相，还是会吸到蛋白。”
江河回答：“所以，洗两遍，双重氯仿抽提，第一次加氯仿离心后，吸取上清液，移入新的离心管，然后，往吸出的这部分上清液里，再加一次等体积的氯仿，剧烈震盪，进行第二次离心，简单来说，牺牲第一次的取液量来换取纯度，然后再通过加入糖原共沉淀，把浓度拉回来。”
这下大家听懂了。
无限小说网